爆款產(chǎn)品Super GelRed (BN20292)和 Super GelGreen(BN25006)是高靈敏、 無毒超安全和超穩(wěn)定的熒光核酸凝膠染色試劑，可替代溴化乙錠 （EtBr， EB）等不安全的核酸染料。

◆膠染法中 DNA 條帶彌散，拖尾?

 1.將 DNA 上樣量減少至三分之一或五分之一。Super GelRed 比 EB 更加靈敏，條帶的彌散或拖尾可能是超載造成的。這是 DNA ladder 的常見現(xiàn)象，推薦使用我司提供的與 Super GelRed 匹配性較好的 DNA ladder。

 2.確保使用的染料終濃度為1×。

 3.用泡染法（后染）代替膠染法（前染）。

 4.使用低濃度的瓊脂糖凝膠檢測大片段 DNA。

 5.更換電泳緩沖液，TBE 緩沖液比 TAE 緩沖液的效果好。

 6.loading buffer 含有 SDS 可能會引起條帶的彌散和拖尾，如果發(fā)生這種情況，建議使用泡染法。

◆膠染法中 DNA 遷移率的差異？

 由于 Super GelRed  的分子量較大，導(dǎo)致其不能進(jìn)入細(xì)胞，保證了染料的安全性。但是，大分子量導(dǎo)致 DNA 的遷移速率可能會受到染料與 DNA 比率的影響。

 1. 將 DNA 上樣量減少至三分之一或五分之一。

 2. 使用泡染法，避免染料在電泳過程中對遷移造成干擾。

◆熒光較弱，一段時(shí)間后染料性能降低，或使用后染法染色不均勻？

 染料可能在溶液中已沉淀。

 1. 加熱 Super GelRed  至 45-50℃，2min，渦旋溶解。

 2. 染料在室溫下儲存，避免沉淀。

◆Super GelRed 是否可用于單鏈 DNA 或 RNA 染色？

 Super GelRed 可以用來染色單鏈 DNA 和 RNA，但是它對雙鏈 DNA 的靈敏度是單鏈 DNA 或 RNA 的五倍。

◆Super GelRed  與哪些 loadingbuffer 兼容？

 我們通常使用含有 15% glycerol, 7.5% Ficoll 400, 0.05% Bromophenol Blue,and 0.1% Patent Blue VF 的 6× loading buffer。在內(nèi)部測試中，包含 0.1%Orange G 的 6X loading buffer 在 Super GelRed  的前染和后染中都有良好。

◆為什么我會看到污染或微笑的 DNA 條帶或不一致的 DNA 遷移？

 1.GelRed 和 GelGreen 是為安全而設(shè)計(jì)的分子量較大的高效親和型染料，在凝膠電泳中它們可以影響 DNA 的遷移。下列建議可能會提高凝膠中的 DNA 條帶分離效果。

 2.減少 DNA 上樣量。污染和微笑條帶往往是過量的 DNA 樣本造成的。推薦的泳道和已知濃度的樣品的上樣量為 50-200ng/泳道。對于未知濃度的樣品，嘗試 1/2 或 1/3 的常用上樣量

 3.制百分比濃度小的瓊脂糖凝膠。高分子量的 DNA 在低百分比的瓊脂糖凝膠分離效果比較好。

 4.更換電泳緩沖液。TBE 緩沖液比 TAE 緩沖液的效果更好。

 5.為了避免染料可能對 DNA 遷移的干擾，我們建議使用電泳后染膠。如果跑膠程序需要的上樣量超過推薦量，建議使用電泳后染色法。

◆為什么我會看到熒光弱，時(shí)間久染料性能降低，或后染染色后有一層染料在膠上？

 1.染料可能從溶液中沉淀出來。

 將 GelRed 或 GelGreen 溶液加熱至 45-50℃，保持 2 分鐘，然后渦旋溶解。在室溫下儲存染料以避免沉淀。

 2.如果您看到凝膠的高背景染色，您使用的瓊脂糖可能質(zhì)量較差。瓊脂糖中的污染物可能與染料結(jié)合，導(dǎo)致背景增加。

◆GelRed 和 GelGreen 有什么區(qū)別？我應(yīng)該選擇哪一個(gè)？

 GelRed 和 GelGreen 之間的主要區(qū)別在于它們的熒光激發(fā)和發(fā)射波長不同。GelRed 具有紅色熒光，類似于溴化乙錠。GelGreen 具有綠色熒光，類似于 SYBR Green 或 SYBR Safe。Gelred 與 UV 和藍(lán)光透射儀均兼容。GelGreen 適合在藍(lán)光透射儀下使用，使用戶可以避免將自身和 DNA 樣品暴露在紫外線輻射下。

◆為什么有 GelRed 和 GelGreen 兩種溶劑（二甲基亞砜 DMSO 和水）？在 DMSO 和水中的染料是否存在差異？

 水溶解的產(chǎn)品相對于儲存在 DMSO 中，是一個(gè)全新的改良。由于 DMSO 會被皮膚吸收，我們建議染料溶于水，以避免處理二甲基亞砜存在的潛在危害。鑒于有些工業(yè)用戶不希望改變實(shí)驗(yàn)方案，我們將繼續(xù)提供儲存在DMSO 的染料。經(jīng)過內(nèi)部測試，兩種溶劑方案的效果完全一樣。

◆GelRed 和 GelGreen 用后應(yīng)該如何處置？

 GelRed 和 GelGreen 通過 EPA 環(huán)保監(jiān)管局 22 個(gè)指標(biāo)測試。GelRed 和 GelGreen 已經(jīng)被相關(guān)部門批準(zhǔn)，可以直接傾倒入下水道。然而，由于地方規(guī)定的差異，您可以請聯(lián)系您當(dāng)?shù)氐陌踩O(jiān)管部門，獲取相關(guān)條例。詳情請查閱 Biotium 公司 GelRed / GelGreen 安全報(bào)告信息。百瑞極所生產(chǎn) Super GelRed 和 GelGreen 和 Biotium 公司所產(chǎn)兩款產(chǎn)品完全等同。百瑞極的 GelRed 也通過了水生動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)，完全可以直接排入下水道。

◆可以提前制作 GelRed/GelGreen 凝膠，儲存供以后使用嗎？

 可以，Super GelRed 和 GelGreen 染料是穩(wěn)定的。在保證瓊脂糖凝膠的完整性不會被破壞的前提下，你可以將預(yù)制的 Super GelRed / GelGreen 凝膠儲存供以后使用。我們建議在 4℃ 避光貯存凝膠。

◆GelRed/GelGreen 后染法染色液可以重復(fù)使用嗎？

 可以。但是，如果靈敏度降低，請使用新鮮的染料溶液。

◆GelRed/GelGreen 是否與克隆、連接和測序等下游應(yīng)用兼容？

 是。我們建議使用百瑞極DNA 純化回收試劑盒（BN12022）從 DNA 中去除染料。

 ◆GelRed/GelGreen 可否用于染色 sDNA 或 RNA 嗎？

 可以，但 Super GelRed 對單鏈核酸的敏感性比 GelGreen 約高 5 倍。使用熒光酶標(biāo)儀的滴定測定顯示，與 ssDNA 和 RNA 結(jié)合的 Super GelRed 的熒光信號約是與 dsDNA 結(jié)合的一半。

◆我應(yīng)該在我的 6×DNA loading buffer 中加入多少 Super GelRed/GelGreen ？

 我們不建議將 GelRed/GelGreen 直接添加到 loading 緩沖液中，因?yàn)檫@會導(dǎo)致條帶遷移不準(zhǔn)確。百瑞極提供 6×Super GelRed Prestain Loading Buffer（BN12006），專為此應(yīng)用而設(shè)計(jì)，但我們不推薦用于需要精確確定 DNA 大小的應(yīng)用。為了最準(zhǔn)確地確定 DNA 條帶大小，我們建議使用 GelRed 后染法（詳情請參閱 Super GelRed 使用說明書）。

◆GelRed/GelGreen 的檢測下限是多少？

 GelRed/GelGreen 是超敏感染料。一些用戶報(bào)告能夠檢測含有少于 0.1 ng DNA 的條帶。但是，染色的靈敏度取決于儀器功能和曝光設(shè)置。