本文主要針對以下幾個常見的亞細胞架構(gòu)：細胞膜、細胞質(zhì)、細胞骨架，為大家介紹如何選擇合適的試劑/探針分別對它們進行染色。

利用熒光染料對細胞膜進行標記和示蹤的成像技術(shù)是研究細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的重要手段。

DiD、DiO、DiI、DiR和DiS染料是最常見的細胞膜染料，它們是一族親脂性的熒光染料，專門用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。該系列染料進入細胞膜后，會在整個細胞膜上側(cè)向擴散，在最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。它們與細胞膜結(jié)合后熒光強度會大大增強，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命，高熒光強度至少維持在30天，甚至長達2年以上。

DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和DiR（深紅色熒光）的獨特熒光顏色為活細胞的多色成像和流式細胞分析提供了便利的工具。

DiO和DiI可分別與標準FITC和TRITC過濾器一起使用。

DIO染料聚合物在3D腫瘤球體中的標記

DiI染料標記雞胚胎神經(jīng)嵴細胞

DiD被633 nm He-Ne激光器激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射波長，為標記具有顯著內(nèi)在熒光的細胞和組織提供了有價值的替代方案。DID染料的染色效率高，均一，不易猝滅，無明顯細胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DID已成功應(yīng)用于多種細胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細胞、間充質(zhì)干細胞、腫瘤細胞、造血干細胞等。

DID染色效率的激光共聚焦掃描成像圖

DiR發(fā)出的紅外光可以通過細胞和組織的有效傳輸以及紅外范圍內(nèi)的低水平自發(fā)熒光，可用于體內(nèi)成像或示蹤。

細胞質(zhì)是細胞質(zhì)膜以內(nèi)、細胞核以外的部分。細胞質(zhì)基質(zhì)是指細胞質(zhì)去除細胞器之外的部分，呈現(xiàn)膠質(zhì)狀態(tài)。是正常細胞進行生命活動的主要場所，正常狀態(tài)下為透明的膠狀物，內(nèi)含細胞新陳代謝所需的多種營養(yǎng)物質(zhì)，由水、無機鹽、脂質(zhì)、糖類、氨基酸、核苷酸和多種酶組成。

Calcein AM/6-CDCFDA 都是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑。

原理相似：Calcein AM/6-CDCFDA能夠輕易穿透活細胞膜，進入到細胞質(zhì)后，酯酶會將其水解留在細胞內(nèi)，發(fā)出強熒光。因為其細胞毒性低，是最適合作為活細胞的熒光探針。

而Lucifer Yellow Cadaverine 通常作為可固定的熒光示蹤劑。Lucifer Yellow Cadaverine 可以標記細胞中的內(nèi)吞噬泡。由于其水溶解度高、熒光明亮、細胞毒性低，并且具有較寬的Stokes shift，我們可以在固定和活細胞中觀察內(nèi)吞噬泡。此外，它還可以用于結(jié)合羧酸基團。

細胞骨架指真核細胞質(zhì)中與保持細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和細胞運動有關(guān)的蛋白質(zhì)纖維網(wǎng)架體系(包括微管、微絲、中間絲)。主要參與維持細胞形狀、細胞運動、細胞內(nèi)物質(zhì)運輸、染色體分離和細胞分裂等重要生命活動。

微絲呈細絲狀，在細胞中成束排列，其主要成分是肌動蛋白，絲狀肌動蛋白（F-actin）是肌動蛋白多聚體，由肌動蛋白單體（G-actin）形成。

微絲在細胞生命活動中有許多重要功能。

鬼筆環(huán)肽是從致命的鵝膏菌（Amanita phalloides）蘑菇中分離的毒素，是一種雙環(huán)肽，能與F-actin特異性結(jié)合。當用熒光染料標記時，可以顯示微絲骨架在細胞中的分布，它是研究F-肌動蛋白分布的非常方便的工具。熒光標記的鬼筆環(huán)肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結(jié)合并且易溶于水，為檢測組織切片，培養(yǎng)細胞和無細胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標記方法。

產(chǎn)品特點 ： 

多種顏色可選擇，熒光亮度高，光穩(wěn)定性好，適合做顯微鏡檢測。
親和力高：平均每個 F - actin 亞基結(jié)合一個鬼筆環(huán)肽分子。

特異性強：特異性結(jié)合于 F - actin，而不與 G - actin 結(jié)合。

優(yōu)于抗體染色：與 F - actin 的結(jié)合親和力在不同物種間無顯著變化。

靈敏度高：納摩爾濃度 (nM) 染色即可滿足實驗要求。

適用范圍廣：無物種差異性，也適用于甲醛固定和打孔處理后的組織樣本。