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FUJIFILM Wako 304-93521 Phos-tag? 丙烯酰胺

Phos-tag? Acrylamidewako

SDS-PAGE 分離不同磷酸化水平的蛋白！



　　在不使用放射性同位素的情況下，利用 Phos-tag? SDS-PAGE 即可分離不同條帶中的磷酸化和非磷酸化蛋白。分離后的凝膠可用于 Western blotting 和質(zhì)譜分析等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

　　Phos-tag? SDS-PAGE 操作簡(jiǎn)單，只需在常規(guī) SDS-PAGE 膠中加入 Phos-tag? Acrylamide 和 Mn2+ 或者 Zn2+ 即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在電泳過(guò)程中，磷酸化蛋白的磷酸基團(tuán)與 Phos-tag? 中的二價(jià)金屬離子相結(jié)合，降低其遷移速度，從而可區(qū)分磷酸化與非磷酸化蛋白。



◆原理


phos-tag原理



◆優(yōu)點(diǎn)、特色


●  采用 Phos-tag? SDS-PAGE 可輕松分離磷酸化蛋白

　  無(wú)任何放射性元素及化學(xué)標(biāo)記！

●  可檢測(cè)不同磷酸化水平的磷酸化蛋白

　  無(wú)需任何磷酸化抗體！

●  適用于內(nèi)源性蛋白的磷酸化分析！



◆案例、應(yīng)用






【使用Phos-tag? SDS-PAGE的磷酸化/非磷酸化蛋白比較】


我推薦使用Phos-tag ? ——東京大學(xué)研究院醫(yī)學(xué)研究科 小川覺(jué)之


　　Phos-tag ? 是專(zhuān)為研究磷酸化蛋白而新開(kāi)發(fā)出來(lái)的試劑。此產(chǎn)品使用方便，不但可用于體外實(shí)驗(yàn)，還能定量分析體內(nèi)蛋白的磷酸化水平。Phos-tag ? SDS-PAGE 可用于常規(guī)電泳實(shí)驗(yàn)，無(wú)需購(gòu)買(mǎi)特殊設(shè)備，性?xún)r(jià)比高。傳統(tǒng)蛋白磷酸化的研究需要特異的磷酸化抗體、RI 等其它試劑，操作復(fù)雜，花費(fèi)大，且放射性元素會(huì)有安全隱患，而 Phos-tag ? 的出現(xiàn)恰恰可以彌補(bǔ)這些缺點(diǎn)，為磷酸化蛋白研究提供新的方向。


磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白利用Phos-tag ? SDS-PAGE 的分離效果圖


03.jpg


　　Lane 1 為非磷酸化蛋白，Lane 2-5 為磷酸化蛋白，各蛋白因磷酸化狀態(tài)不同而條帶遷移率也有所不同。

　　磷酸化/ 非磷酸化蛋白的數(shù)量比、磷酸化程度、磷酸化蛋白的豐度等都可根據(jù)條帶遷移和條帶濃度求得。


【資料提供】

日本東京大學(xué)研究生院醫(yī)學(xué)系研究科



【二維電泳中的應(yīng)用：分析 hnRNP K 磷酸化異構(gòu)體】


　　小鼠巨噬細(xì)胞 J774.1 經(jīng) LPS 刺激后，裂解細(xì)胞，經(jīng)過(guò)免疫沉淀法分離得到 hnRNP K 。在二維電泳中，一維是IPG 膠，二維是 Phos-tag ? SDS-PAGE，可分離 hnRNP K 的異構(gòu)體。利用質(zhì)譜儀，可以確認(rèn)不同的點(diǎn)代表不同的亞型或修飾蛋白。


二維電泳


04.jpg


　　同一個(gè)等電點(diǎn)的位置上，不同位點(diǎn)發(fā)生磷酸化都可以被區(qū)分開(kāi)來(lái)（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）


【參考文獻(xiàn)】

Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics , Nov 2010; 10(21): 3884-95.


【結(jié)果提供】

　　橫濱市立大學(xué) 生命納米系統(tǒng)科學(xué)研究科 生物體超分子系統(tǒng)科學(xué)專(zhuān)業(yè) 木村彌生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）理化學(xué)研究所 RCAI 小原收



【EGF 刺激前后MAPK 磷酸化水平的變化】


　　常規(guī) SDS-PAGE 和Phos-tagTM SDS-PAGE 后迚行克疫印跡實(shí)驗(yàn)分析 EGF 刺激的 A431 細(xì)胞中 MAPK 磷酸化水平。


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摘自 Kinoshita-Kikuta, E. et al., Mol.Cell. Proteomics. (2007)6: 356.



◆相關(guān)產(chǎn)品


　產(chǎn)品名稱(chēng)

　用　　途

　Phos-tag? Acrylamide

　分離: SDS - PAGE 分離不同磷酸化水平的蛋白

　SuperSep Phos-tag?

　分離: 預(yù)制膠中含有50μM Phos-tag? Acrylamide

　Phos-tag? Biotin

　檢測(cè): 代替 Western Blot 檢測(cè)中的磷酸化抗體

　Phos-tag? Agarose

　純化: 通用柱層析，純化磷酸化蛋白

　Phos-tag? Mass

　Analytical Kit

　分析: 用于質(zhì)譜 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的檢測(cè)靈敏度


phos-tag? 由日本廣島大學(xué)研究生院醫(yī)齒藥學(xué)綜合研究科醫(yī)藥分子功能科學(xué)研究室開(kāi)發(fā)，對(duì)應(yīng)指導(dǎo)手冊(cè)請(qǐng)見(jiàn)相關(guān)資料。




產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱(chēng)產(chǎn)品規(guī)格產(chǎn)品等級(jí)備注
304-93526 Phos-tag Acrylamide AAL-107
 5mM Aqueous Solution Phos-tag 丙烯酰胺5mM水溶液		0.3 mL蛋白研究-
300-93523 Phos-tag Acrylamide AAL-107 
Phos-tag 丙烯酰胺		2 mg蛋白研究-
304-93521 Phos-tag Acrylamide AAL-107
Phos-tag 丙烯酰胺		10 mg蛋白研究-
134-15302Manganese(II) Chloride Tetrahydrate氯化錳四水合物25 gfor Molecular Biology-


※ 本頁(yè)面產(chǎn)品僅供研究用，研究以外不可使用。

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