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FUJIFILM wako | NK 細(xì)胞抑制劑 Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)

NK細(xì)胞抑制劑

Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)

糖脂神經(jīng)節(jié)苷脂GM1(ASGM1)在感染病毒時(shí)的T細(xì)胞及自然殺傷(NK)細(xì)胞中表達(dá)。ASGM1局部存在于NK和CD8(+)細(xì)胞的脂筏結(jié)構(gòu)中，抗Asialo- GM1抗體可降低在各種小鼠、大鼠中的NK細(xì)胞活性。

接種抗Asialo-GM1抗體至實(shí)驗(yàn)動物，去除NK細(xì)胞，用于NK細(xì)胞的功能分析或移植其他物種來源的腫瘤組織至小鼠體內(nèi)^1）2）。

ASGM1也在嗜堿性細(xì)胞中表達(dá)，有報(bào)告稱，抗Asia-GM1抗體也可用于去除嗜堿性細(xì)胞^3）。

■ 參考文獻(xiàn)

1）	Kasai M., Iwamori M., Nagai Y., Okumura K., and Tada T. : J. Immunol., 10, 175 (1980).
2）	Habu S., Fukui H., Shimamura M., Kasai M., Nagai Y., Okumura K., and Tamaoki N. : J. Immunol., 127, 34 (1981).
3）	Hideto, N., Kaori, M., Yohei, K., Yoshiyuki, M., and Hajime K., .: J. Immunol., 186, 10, 5766(2011)

◆原理介紹

　　 Anti Asialo-GM1（Rabbit）抗血清可以減少大鼠或者小鼠來源的自然殺傷細(xì)胞（NK 細(xì)胞）的活性。該抗體可以與 NK 細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合，從而抑制 NK 細(xì)胞非特異性殺傷靶細(xì)胞的活性。NK 細(xì)胞是一種免疫監(jiān)視細(xì)胞，其靶細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞、同種異體移植的器官、組織等?？蛇\(yùn)用于藥物篩選，器官移植，自身免疫疾病等研究。

　　每個(gè)產(chǎn)品有具體的體內(nèi)外的滴定數(shù)據(jù)。

◆特點(diǎn)

●　已經(jīng)體內(nèi)NK細(xì)胞活性驗(yàn)證

●　眾多文獻(xiàn)應(yīng)用案例

特性	抗Asialo-GM1抗體、凍干品
免疫方法	牛腦組織純化的Asialo-GM1甲基化BSA（bovine serum albumin），與FCA（Freund’s complete adjuvant）　同時(shí)對兔免疫。
純化方法	50％硫酸銨鹽化后，使用含有磷酸緩沖液(pH=7.2)的生理鹽水透析。
特異性	與小鼠、大鼠的NK細(xì)胞以及小鼠胚胎胸腺細(xì)胞反應(yīng)。
復(fù)溶	請?jiān)? mL蒸餾水中復(fù)溶。建議使用磷酸緩沖液（pH 7.2）進(jìn)行稀釋。
接種方法	一只小鼠靜脈注射10~50 μL。

◆注射方法

小鼠-靜脈注射：

10-50 μL（推薦 20 μL）具體劑量由滴度和規(guī)格而定。第一次注射在４天內(nèi)有效，因此兩周內(nèi)需要注射３-４次。

大鼠-靜脈注射：

50-250 μL（小鼠劑量的４或５倍）具體劑量還須考慮大鼠的健康狀況、體重和 NK 活性。

小鼠和大鼠-腹腔給藥：

同等劑量或多于靜脈注射。

◆產(chǎn)品信息

制備：	從牛腦組織里提純的 Asialo-GM1 與甲基化牛血清白蛋白和弗氏完全佐劑一起使用，可進(jìn)行反復(fù)免疫。用含有磷酸緩沖鹽水（ph7.2）的 50% 硫酸銨透析后，得到血清里的丙種球蛋白（Gammaglobulin）片段。
內(nèi)容：	含有唾液酸抗體 GM1 的兔血清 50% 硫酸銨鹽析分層物（含蛋白量約 10 mg/mL）。
提純法：	50% 的硫酸銨鹽析后，用含有磷酸緩沖液的生理鹽水透析，然后凍干。
特異性：	作用于小鼠和大鼠的自然殺傷細(xì)胞；小鼠單核細(xì)胞（是一種不含自然殺傷細(xì)胞、骨髓、胎兒肝細(xì)胞和裸鼠脾臟巨噬細(xì)胞的肝細(xì)胞）；小鼠胎兒胸腺細(xì)胞（12日齡；生存率不斷降低直到?jīng)]有出現(xiàn)新生小鼠）（備注：如果濃度高，也能作用于成熟的T淋巴細(xì)胞）
免疫球蛋白類型：	IgG、IgA 和 IgM
重組：	建議用蒸餾水（1 mL）。由于該產(chǎn)品是使用鹽來進(jìn)行凍干的，如果用其它溶劑如 PBS 或 MEM，就能增加其鹽濃度。
抗體滴度：	通過免疫凝聚實(shí)驗(yàn)得出結(jié)果，抗體滴度比例約 1 : 1,000
保存方法：	存儲在２~10℃下
包裝規(guī)格：	１mL樣瓶
形狀：	干凍品

欲了解詳情請看相關(guān)資料

◆應(yīng)用案例

適用的動物模型	運(yùn)用
腫瘤動物模型	與抗腫瘤藥物混合后注入腫瘤動物模型內(nèi)，研究抗腫瘤藥物的作用機(jī)理。
肝纖維化動物模型	與治療肝纖維化的藥物混合后注入動物模型體內(nèi)，研究抗肝纖維化藥物的作用機(jī)理。
器官移植動物模型	器官移植后，會產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，機(jī)體內(nèi)的免疫監(jiān)視會清除”異己“的細(xì)胞和器官。可用于研究器官移植后使用的免疫抑制劑的作用機(jī)理
自身免疫疾病動物模型	研究治療自身免疫疾病藥物的作用機(jī)理。
干細(xì)胞動物模型	抑制 NK 細(xì)胞的活性，從而有利于干細(xì)胞動物模型的建立。
糖尿病動物模型	研究炎癥與糖尿病的關(guān)系。

◆抗Asialo-GM1抗體體外活性

向抗Asialo-GM1抗體中添加豚鼠來源補(bǔ)體，并在BALB/c小鼠的胰腺細(xì)胞中進(jìn)行處理。通過靶向YAC-1細(xì)胞(●)體外檢測NK活性。

效應(yīng)子/靶標(biāo)的比率為50：1，○表示補(bǔ)體處理后BALB/c小鼠胰腺細(xì)胞的NK活性。

※ BALB/c小鼠經(jīng)聚(I:C)鈉鹽100 μg（0.2 mL的500 μg/ mL）處理后，正常飼養(yǎng)18小時(shí)后開始下一步操作。

◆抗Asialo GM1抗體體內(nèi)活性

向BALB/c小鼠腹腔內(nèi)注射抗Asialo-GM1抗體，并檢測單次給藥（效應(yīng)子/靶標(biāo)= 50：1）3天后收集的胰腺細(xì)胞對YAC-1細(xì)胞的腫瘤溶解度。

※ BALB/c小鼠經(jīng)聚(I:C)鈉鹽100 μg（0.2 mL的500 μg/ mL）處理后，正常飼養(yǎng)18小時(shí)后開始下一步操作。

■ 對照：正常兔血清

腹腔注射量	腫瘤溶解度（%）
100 μL	70.8

■ 抗Asialo-GM1抗體

腹腔注射量	腫瘤溶解度（%）
10 μL	7
25 μL	8.4
50 μL	2
100 μL	0

※ 本頁面產(chǎn)品僅供研究用，研究以外不可使用。

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品等級
014-09801(986-10001)	Anti asialo GM1 (Rabbit) NK細(xì)胞抑制劑	1 mL	for Immunochemistry

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了解應(yīng)用案例

Anti Asialo GM1的抗血清可以與NK細(xì)胞（自然殺傷細(xì)胞）結(jié)合，抑制NK細(xì)胞非特異性殺傷靶細(xì)胞的活性。靶細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞，同種異體移植的器官、組織等?？捎糜谒幬锖Y選、器官移植、自身免疫疾病研究等。NK細(xì)胞屬于天然免疫細(xì)胞，具有免疫監(jiān)視功能。

　　特異性：小鼠、大鼠的NK細(xì)胞，小鼠單核細(xì)胞（不含有NK細(xì)胞的肝臟細(xì)胞，骨髓，胎兒肝臟細(xì)胞，裸鼠巨噬細(xì)胞的脾細(xì)胞），胎兒T淋巴細(xì)胞（12天）。

◆研究糖尿病的免疫治療

　　據(jù)報(bào)道，抗細(xì)胞凋亡細(xì)胞因子IL-15具有促進(jìn)NK細(xì)胞和T細(xì)胞（包括調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，Tregs）存活和激活上述兩種細(xì)胞活性的功能。在患有糖尿病的NOD小鼠體內(nèi)反復(fù)注射IL-15。如果每天一次，注射2周，既不抑制也不加速未處理NOD小鼠患糖尿病的情況。但是NK細(xì)胞活性喪失的NOD小鼠注射IL-15可以明顯減少糖尿病的發(fā)病率和延遲糖尿病發(fā)病時(shí)間，但是NK細(xì)胞活性喪失不注射IL-15的小鼠依然病發(fā)糖尿病。在用IL-15處理，NK細(xì)胞活性喪失的NOD小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的保護(hù)效應(yīng)與CD4⁺CD25⁺ Tregs免疫抑制活性增加有關(guān)。在該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，用Anti AsGM1注射小鼠，抑制NK細(xì)胞活性，導(dǎo)致NOD小鼠NK細(xì)胞活性缺失。

參考文獻(xiàn)：Jinxing Xia et al., Clinica l Immunology.(2010) 134, 130–139 <全文>

◆研究敗血癥中NK細(xì)胞的功能

　　NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞都屬于天然免疫系統(tǒng)，但在細(xì)菌引起的敗血癥中這兩種細(xì)胞的作用是有爭議。用Anti Asialo GM1處理小鼠，成為NK細(xì)胞活性抑制的小鼠；用CD1d單抗處理小鼠，成為NKT細(xì)胞活性抑制的小鼠；同時(shí)用同型對照單抗處理小鼠，作為陰性對照。之后這些小鼠感染肺炎鏈球菌。分析血清和組織樣品中細(xì)菌的含量，細(xì)胞因子，脾細(xì)胞凋亡率、用流式鑒定細(xì)胞，同時(shí)也分析脾細(xì)胞miRNA的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞活性抑制的小鼠延長了存活率。一旦NKT細(xì)胞激活抑制，與其他細(xì)胞群相比，脾臟的NK (CD3?/NK1.1+)細(xì)胞數(shù)目增加。NKT細(xì)胞活性抑制導(dǎo)致小鼠體內(nèi)的細(xì)菌含量升高，導(dǎo)致血清和脾細(xì)胞IFN-γ水平升高?？笴D1d處理小鼠的脾細(xì)胞miRNA分析顯示miR-200C和miR-29a下調(diào)，miR-125a-5p上調(diào)。這些變化發(fā)生在NK細(xì)胞活性抑制后。NK細(xì)胞可能與肺炎球菌肺炎的死亡率有關(guān)。抑制NKT細(xì)胞的激活導(dǎo)致(CD3?/NK1.1+)細(xì)胞數(shù)目增加，IFN-γ水平升高，改變脾細(xì)胞miRNA表達(dá)。

參考文獻(xiàn)：Eirini Christaki et al., Journal of Immunology Research, Volume 2015 (2015),Article

　　　　　ID 532717, 10 pages <全文>

◆研究自身免疫性疾病的NK細(xì)胞功能

　　NK細(xì)胞是先天免疫淋巴細(xì)胞，在先天免疫和適應(yīng)性免疫中均起著關(guān)鍵性作用。它在小鼠體內(nèi)通過NK細(xì)胞消耗 Abs，特別是抗唾液酸GM1 (ASGM1)，起關(guān)鍵作用。此次研究中，我們通過整個(gè)嗜堿性粒細(xì)胞群體組成如表達(dá)NK細(xì)胞群一樣，來表達(dá)ASGM1以及CD49b（DX5），并通過抗ASGM1在體內(nèi)通過嗜堿性粒細(xì)胞消耗的抗FcεRIαAb有效地消融?？笰SGM1介導(dǎo)的嗜堿性粒細(xì)胞的消耗與各種小鼠品系的NK細(xì)胞消耗有關(guān)，與NK1同種異型和MHC H2單體型（包括C57BL/6，BALB/c，C3H和小鼠A/J）無關(guān)。這些結(jié)果將嗜堿性粒細(xì)胞定義為以前未被認(rèn)識到的抗ASGM1介導(dǎo)細(xì)胞消耗的靶標(biāo)，并引起人們對嗜堿性粒細(xì)胞的關(guān)注，而不是NK細(xì)胞或除了NK細(xì)胞外對抗ASGM1處理的小鼠中觀察到的某些表型。

參考文獻(xiàn)：Nishikado H, Mukai K, Kawano Y, et al. NK cell-depletinganti-asialo GM1 antibody exhibits

　　　　　a lethal off-target effect on basophils invivo[J]. The Journal of Immunology,

　　　　　2011, 186(10): 5766-5771<全文>

◆研究腫瘤的免疫治療

　　腫瘤的發(fā)展過程包括血管新生，腫瘤尺寸增大和腫瘤轉(zhuǎn)移。使用CXCL14/BRAK (CXCL14) 轉(zhuǎn)基因小鼠研究過度表達(dá)的CXC趨化因子配體14 (CXCL14) 在上述生物學(xué)現(xiàn)象中的作用。與野生型小鼠相比，轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)AOM/DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸血管新生的發(fā)病率顯著低很多。腫瘤細(xì)胞注射到這些小鼠后，腫瘤尺寸發(fā)生變化。與野生型的相比，轉(zhuǎn)基因小鼠肺中轉(zhuǎn)移小瘤的數(shù)目明顯少，腫瘤的尺寸也明顯變小。在注射腫瘤前后注射Anti Asialo GM1減少了CXCL14在腫瘤生長方面和腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制效應(yīng)，表明激活的NK細(xì)胞在CXCL14介導(dǎo)的抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移期間起重要作用。CXCL14也表達(dá)在B16黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)表明NK細(xì)胞在腫瘤轉(zhuǎn)移方面的重要性。而且轉(zhuǎn)基因小鼠在注射腫瘤細(xì)胞后的存活率顯著增長。這些轉(zhuǎn)基因小鼠沒有明顯的不正常，預(yù)計(jì)腫瘤抑制/預(yù)防方面CXCL14起著重要作用。

參考文獻(xiàn)：Hata R et al.,Scientific Reports(2015) 5 : 9083 | DOI: 10.1038/srep09083 <全文>

動物模型	運(yùn)用
腫瘤動物模型	與抗腫瘤藥物混合后注入腫瘤動物模型體內(nèi)，研究抗腫瘤藥物是否通過激活NK細(xì)胞活性達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。
肝病動物模型	與治療肝病的藥物混合后注入動物模型體內(nèi)，研究藥物是否通過激活NK細(xì)胞活性達(dá)到治療肝病的效果。
器官移植動物模型	器官移植后會發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，機(jī)體內(nèi)的免疫監(jiān)視系統(tǒng)會清除：異己“的細(xì)胞和器官?？捎糜谘芯科鞴僖浦埠竺庖咭种苿┑淖饔脵C(jī)理。
自身免疫疾病動物模型	研究治療自身免疫疾病藥物的作用機(jī)理。
干細(xì)胞動物模型	移植NK細(xì)胞活性，有利于干細(xì)胞動物模型的建立。

◆參考文獻(xiàn)

[1]	Nishikado H, Mukai K, Kawano Y, et al. NK cell-depletinganti-asialo GM1 antibody exhibits a lethal off-target effect on basophils invivo[J]. The Journal of Immunology, 2011, 186(10): 5766-5771.
[2]	Kasai, M., Iwamori, M., Nagai, Y., Okumura, K. and Tada, T.: Eur. J. Immunol., 10, 175 (1980)
[3]	Habu, S., Fukui, H., Shimamura, M., Kasai, M., Nagai, Y., Okumura, K. and Tamaoki, N.: Immunol., 127, 34 (1981)
[4]	Jinxing Xia et al., Clinica l Immunology.(2010) 134, 130–139.
[5]	Eirini Christaki et al., Journal of Immunology Research, Volume 2015 (2015), Article ID 532717, 10 pages.
[6]	Hata R et al.,Scientific Reports(2015) 5 : 9083 \| DOI: 10.1038/srep09083
[7]	Ivanova, D. L., Denton, S. L., & Gigley, J. (2019). Anti-Asialo GM1 treatment during secondary Toxoplasma gondii infection is lethal and depletes T cells. bioRxiv, 550608.
[8]	Sung, C. C., Horng, J. H., Siao, S. H., Chyuan, I. T., Tsai, H. F., Chen, P. J., & Hsu, P. N. (2020). Asialo GM1-positive liver-resident CD8 T cells that express CD44 and LFA-1 are essential for immune clearance of hepatitis B virus. Cellular & Molecular Immunology, 1-11.
[9]	Fujii, Y., Gerdol, M., Kawsar, S. M., Hasan, I., Spazzali, F., Yoshida, T., ... & Sugawara, S. (2019). A GM1b/asialo‐GM1 oligosaccharide‐binding R‐type lectin from purplish bifurcate mussels Mytilisepta virgata and its effect on MAP kinases. The FEBS journal.
[10]	Kikuchi, N., Ye, J., Hirakawa, J., & Kawashima, H. (2019). Forced expression of CXCL10 prevents liver metastasis of colon carcinoma cells by the recruitment of natural killer cells. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 42(1), 57-65.
[11]	Jones, N. M., Yang, H., Zhang, Q., Morales-Tirado, V. M., & Grossniklaus, H. E. (2019). Natural killer cells and pigment epithelial-derived factor control the infiltrative and nodular growth of hepatic metastases in an Orthotopic murine model of ocular melanoma. BMC cancer, 19(1), 484.
[12]	Vandenhaute, J., Avau, A., Filtjens, J., Malengier-Devlies, B., Imbrechts, M., Van den Berghe, N., ...& Wouters, C. (2019). Regulatory Role for NK Cells in a Mouse Model of Systemic Juvenile Idiopathic Arthritis. The Journal of Immunology, 203(12), 3339-3348.
[13]	Junqueira-Kipnis, A. P., Trentini, M. M., Marques Neto, L. M., & Kipnis, A. (2020). Live Vaccines Have Different NK Cells and Neutrophils Requirements for the Development of a Protective Immune Response Against Tuberculosis. Frontiers in Immunology, 11, 741.
[14]	Murer, P., Kiefer, J. D., Plüss, L., Matasci, M., Blümich, S. L., Stringhini, M., & Neri, D. (2019). Targeted delivery of TNF potentiates the antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity of an anti-melanoma immunoglobulin. Journal of Investigative Dermatology, 139(6), 1339-1348.
[15]	Turaj, A. H., Dahal, L. N., Beers, S. A., Cragg, M. S., & Lim, S. H. (2017). TLR-3/9 Agonists Synergize with Anti-ErbB2 mAb. Cancer research, 77(12), 3376-3378.
[16]	Sorski, L., Melamed, R., Matzner, P., Lavon, H., Shaashua, L., Rosenne, E., & Ben-Eliyahu, S. (2016). Reducing liver metastases of colon cancer in the context of extensive and minor surgeries through β-adrenoceptors blockade and COX2 inhibition. Brain, behavior, and immunity, 58, 91-98.

◆其他文獻(xiàn)

本公司的抗Asialo-GM1抗體在以下為代表的各種文獻(xiàn)中均有應(yīng)用案例。

1.	Hudson, W. A., Li, Q., Le, C., and Kersey, J. H., : Leukemia, 12, 2029 (1998).
2.	Murphy W. J., Durum S. K., Longo D. L., : PNAS, 89, 10, 4481 (1992).
3.	Bentzmann S., Roger P., Dupuit F., Bajolet-Laudinat O., Fuchey C., Plotkowski C. M., Puchelle E. : Infection and immunity, 64, 5, 1582 (1996).
4.	Nishikado H., Mukai K., Kawano Y., Minegishi Y., Karasuyama H. : J. Immunol., 186, 10, 5766(2011).
5.	Victorino, F., Sojka, K. D., Brodsky, S. K. McNamee, N. E., Masterson, C. J., Homann, D., Yokoyama, M. W., Eltzschig, K. H., Clambey, T. E., : J. Immunol., 195, 10, 4973(2015).