PartI: 產(chǎn)品知識 

Q: Amicon Ultra超濾管都有哪些用途？ 

A: Amicon Ultra超濾管可以用于生物樣品（蛋白，核酸，病毒等）的濃縮，脫鹽，或者更 換buffer。

Q：Amicon Ultra超濾管有哪些規(guī)格？ 

A: Amicon Ultra超濾管提供四種樣本體積的規(guī)格：0.5 mL, 2 mL，4 mL & 15 mL，每種 規(guī)格都含有5種標稱截留分子量：3K, 10K, 30K, 50K, 100K。如果處理更大體積的樣本， 歡迎咨詢技術(shù)支持。

Q: Amicon Ultra超濾管的膜材質(zhì)是什么？ 

A: Amicon Ultra超濾管的膜材質(zhì)為再生纖維素膜。 

Q: Amicon Ultra超濾管的化學相容性如何？ 

A: Amicon Ultra超濾管適用于一般的水溶液或生物學樣品，特殊樣本的化學相容性請參考 每個相應(yīng)User Guide中的“Chemical Compatibility”表格，也歡迎撥打我們的技術(shù)服務(wù)熱 線咨詢。 

Q: 我可以重復使用超濾管么？ 

A: 所有的離心超濾管都是一次性的，不推薦重復使用。 

Q: 超濾管可耐受的pH值范圍是多少？ 

A: 對于再生纖維素膜，說明書中所推薦的pH范圍為3-13。具體酸堿類型及濃度請參考說明 書中的化學兼容性表。 

PartⅡ: 產(chǎn)品選擇 

Q: 我該如何選擇合適的Amicon Ultra裝置用于蛋白的濃縮？ 

A: 一般我們推薦選擇的超濾管的標稱分子量為目標蛋白的1/2或者1/3。 

Q: 如果要用超濾的方法分離兩種蛋白，那么這兩個蛋白的大小需要相差多少？ 

A: 按照經(jīng)驗，我們推薦兩個蛋白的分子量要相差一個數(shù)量級（10倍）。

Q: Amicon Ultra超濾管可以用于核苷酸純化與濃縮么？ 

A: 目前我們只在Amicon Ultra 30kDa MWCO上測試過137bp到1159bp雙鏈DNA的濃縮 效果（回收率>90%），具體操作方法及回收效率請參考說明書中DNAConcentration部分。

Q: Amicon Ultra超濾管可以用于病毒濃縮么？ 

A: 可以。對于慢病毒，我們推薦Amincon Ultra 100kDa MWCO; 對于腺病毒，推薦 Amincon Ultra 50kDa MWCO. 具體的操作protocol，可以參考我們的病毒濃縮純化試劑 盒：FTLV00003和FTAV00003。 

Q: Amicon Ultra超濾管可以用于納米顆粒純化與濃縮么？ 

A: 可以。雖然我們沒有內(nèi)部數(shù)據(jù)支持這一應(yīng)用，但是有很多客戶Amicon Ultra超濾管用于納米顆粒的濃縮及純化，并獲得很好的結(jié)果。Amicon Ultra超濾管的標稱分子量對應(yīng)的膜孔 徑范圍請參考下圖：

Q: Amicon Ultra超濾管可以用于外泌小體的純化與濃縮嗎？ 

A: 可以。外泌小體的直徑在30-100nm左右，具體操作可參考下述鏈接： http://www.emdmillipore.com/Web-US-Site/en_CA/- /USD/ViewParametricSearchSimpleOfferSearch?SynchronizerToken=2b698302b8d2f4e477a773d444bf3ca76 d947101e6b05bc1f9b5acfa14a4b929&SynchronizerToken=2b698302b8d2f4e47 7a773d444bf3ca76d947101e6b05bc1f9b5acfa14a4b929&search=&TrackingSear chType=SB+- +Search+Box&SearchContextPageletUUID=&SearchTerm=A+centrifugal+ultrafil tration-based+method+for+enrichment+of+microvesicles+&search= 

Part Ⅲ:實驗操作 

Q: 如果使用Amicon Ultra超濾管，要配什么樣的離心轉(zhuǎn)子，最大離心力是多少？ 

A: 具體參數(shù)請參考下表：

Q: 處理后樣品怎樣收集？ 

A: 兩種方式：移液槍轉(zhuǎn)移和反轉(zhuǎn)離心 （1） 對于15 mL和4 mL的超濾管，可以直接通過移液槍收集處理后樣品 （2） 對于0.5 mL和2 mL的超濾管，可以通過反轉(zhuǎn)離心的方式收集處理后樣品：將有濃 縮樣品的超濾管（內(nèi)管）倒置于新的離心管中后，低速離心（1,000 g）后將樣品重新離 心到新離心管中（如圖1中的Recover步驟所示）

Q: Amicon Ultra超濾管的膜會因為離心時間過長而變干么？ 

A: 不會，因為Amicon Ultra有死體積設(shè)計，總會有溶液殘留在濾管中。 

Q: Amicon Ultrar超濾管可以用酒精消毒滅菌么？ 

A: Amicon Ultra裝置與70%乙醇是兼容的，但是我們對滅菌處理的具體方法沒有做相關(guān)的 測試，所以無法提供更進一步的參考信息。 

Q: Amicon Ultra超濾裝置是否可以用于高壓滅菌？ 

A: 不可以，Amicon Ultra都是采用熱封設(shè)計，不可以用高壓高溫滅菌。 

Q: Millipore是否提供無熱源的超濾裝置？ 

A: 我們提供的超濾裝置均非無熱源的，即使是無菌裝置也可能包含熱源。 

Q: Amicon Ultra超濾管是否不含RNA酶？ 

A: 我們不保證超濾管不包含RNA酶，建議您可以用0.1% DEPC在37度浸泡2小時，以完全 滅活RNA酶。殘留的DEPC可以用Milli-Q超純水洗滌除去。 

Q: 說明書中推薦在室溫下進行離心，考慮到蛋白的穩(wěn)定性，我是否可以在4℃進行離心？ 

A: 可以，但是低溫會增加蛋白樣品的粘性，導致流速減慢，建議可將離心時間延長到原來的 1.5倍。 

Q: 如何對超濾管進行去除內(nèi)毒素的處理？ 

A: 我們提供的超濾管是沒有經(jīng)過去內(nèi)毒素處理的，同時由于內(nèi)毒素通常以多聚體的形式存在， 大小在10-1000KD之間不等，在超濾的過程中是無法去除的?？蛻艨稍趯嶒炃巴ㄟ^先用 0.5M NaOH預(yù)清洗，隨后用Milli-Q水/緩沖液buffer清洗的步驟去除大部分內(nèi)毒素。 

Part Ⅳ:結(jié)果分析 

Q: 用Amicon Ultra超濾管去除去污劑是有什么需要注意的嗎？ 

A: 去污劑因其獨特的性質(zhì)，當濃度大于臨界微團濃度（Critical Micelle Concentration,  CMC）時，去污劑分子會聚集形成微團分子而改變分子構(gòu)象，這有可能會影響去污劑的去除 效果，具體的protocol可以參考 http://www.emdmillipore.com/Web-US-Site/en_CA/- /USD/ViewParametricSearchSimpleOfferSearch?SearchTerm=Detergent+removal+using+Amicon%C2%AE+ Ultra+or+Microcon%C2%AE+centrifugal+ultrafilters+&SelectedSearchResult=S FDocumentSearch&SearchContextPageletUUID= 

Q: 我的蛋白在濃縮時出現(xiàn)了沉淀為什么？ 

A: 蛋白如果濃縮過快或者過度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。我們建議蛋白濃縮后的最終濃度 不超過20mg/ml. 對于對濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，我們建議的改進方法是： 1）離心力降為推薦離心力的30%-50%。 2）改選擇下一級過濾裝置（如原本選用10K，此時可以選擇30K） 3）在濃縮過程中，取出超濾管，用槍頭反復吹吸幾次。 

Q: 濃縮后我發(fā)現(xiàn)濃縮液中沒有目的蛋白，可能的原因是？ 

A: 首先，Amicon Ultra超濾管的最低起始蛋白濃度為25ug/ml. 請確保您的樣本的起始濃度 大于這個濃度。 其次，如果問題仍然出現(xiàn)。請不要丟棄您的樣本濾過液，以做下一步分析： 1）如果您的樣本在濾過液中，那么請排查： a) 您是否選擇了合適截留分子量的超濾管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？ b) 使用的離心力是否是在最高范圍內(nèi)？如果您使用的是rpm，請換算成相應(yīng)的g離心，

具體換算方法請參考：https://www.msu.edu/~venkata1/gforce.htm c) 離心機最近是否有校準過？ d) 您是否首次嘗試這個蛋白？如果能確保你用同樣的超濾管對其他蛋白成功操作的話， 那么有可能是您的目的蛋白的原因。有時蛋白會因其本身的一些特性（構(gòu)象差異）而影 響濃縮效果，建議選用上一分子量級別的超濾管（如原本選用30K，此時可以選擇 10K）。 2）如果您的樣本也不在濾過液中： a) 您的樣本起始蛋白濃度是否大于25ug/ml？ b) 您用來確定樣本濃度的方法是什么？是否可信？ c) 您的目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具體解決方法請參考上面的關(guān)于蛋白沉淀的 FAQ。 

Q: 我用濃縮后的蛋白做下游分析時發(fā)現(xiàn)有干擾，可能原因？ 

A: Amicon? Ultra-4裝置的超過濾薄膜含有微量甘油。如果此材料干擾分析，可用緩沖液 或Milli-Q?水預(yù)清洗。如果干擾仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用緩沖液或Milli-Q? 水再次清洗后甩干。 

Q: 有時候我用超濾離心管連水都離不下來，可能原因？ 

A: Amicon? Ultra-4裝置的超過濾薄膜含有微量甘油。如果出現(xiàn)這種情況，先用0.1 N  NaOH清洗再離心。最后用緩沖液或Milli-Q?水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應(yīng)立即使用， 如暫時不用，請保持潤濕狀態(tài)，避免重新干燥。 

Q: 使用超濾管對蛋白進行濃縮的過程中懷疑目的蛋白和膜之間可能存在非特異性吸附，如何 改善這一現(xiàn)象？ 

A: 超濾管使用的是再生纖維素膜的材質(zhì)，擁有極低的蛋白吸附能力。但是對于一些疏水性蛋 白或非極性蛋白，它們和膜的非特異吸附可能會增強，對于這種情況，客戶可以嘗試在實驗 前對超濾管進行封閉處理，詳細步驟可聯(lián)系技術(shù)支持。 

同時也可建議客戶換成Amicon Ultra 0.5或2來進行實驗，通過減小膜面積來降低非特異性 吸附。

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