抑制劑/激動(dòng)劑在動(dòng)物體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)以其實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)、投入高、影響因素多、實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明性強(qiáng)，而受到極大的重視。而抑制劑/激動(dòng)劑的溶解作為整個(gè)實(shí)驗(yàn)的起始步驟，直接影響化合物在動(dòng)物體內(nèi)的吸收及效用的發(fā)揮。接下來(lái)，默默分別從4個(gè)方面與您分享如何獲得動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可用的抑制劑/激動(dòng)劑溶解體系，助大家發(fā)表高檔次的文章。

在進(jìn)行抑制劑/激動(dòng)劑溶液配置之前，我們先了解一下常用的抑制劑/激動(dòng)劑助溶物。

1. 水溶液

水溶液與動(dòng)物的生理環(huán)境更為接近，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中所給抑制劑/激動(dòng)劑的溶媒最好以水相為主，但考慮到藥理活性，往往不會(huì)有很多水溶性特別好的化合物作為先導(dǎo)化合物，所以大部分化合物在水相中的溶解度滿足不了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的給藥需求。

常用的水溶液包括：水、生理鹽水、5%的葡萄糖水 (D5W)、pH 2-9的緩沖溶液 (buffer)。

2. 環(huán)糊精

環(huán)糊精屬于抑制劑/激動(dòng)劑包合劑，是一種具有親水表面和一個(gè)疏水空腔的環(huán)狀低聚糖，因而它能夠提供一個(gè)疏水的結(jié)合部位，包絡(luò)適當(dāng)?shù)目腕w化合物，如脂溶性化合物、水溶性不好的化合物，與抑制劑/激動(dòng)劑形成水溶性更好的抑制劑/激動(dòng)劑-環(huán)糊精包合體來(lái)提高抑制劑/激動(dòng)劑的水溶性。

常用的環(huán)糊精：羥丙基-β-環(huán)糊精 (HP-β-CD) 和磺丁基-β-環(huán)糊精 (SBE-β-CD)，相對(duì)于β-環(huán)糊精，其衍生物的溶血作用較弱，安全性更好，是目前被FDA批準(zhǔn)的僅有的兩種可注射型環(huán)糊精輔料，其中SBE-β-CD (Captisol，M4837) 的助溶效果優(yōu)于HP-β-CD。

3.助溶劑

由于大部分抑制劑/激動(dòng)劑不會(huì)具有特別好的水溶性，助溶劑能幫助一些水不溶的化合物在水中溶解。

常用的助溶劑：二甲基亞砜 (DMSO)、甲基-2-吡咯烷酮 (NMP)、二甲基乙酰胺 (DMA)、乙醇、聚乙二醇 (PEG300，M9292)、丙二醇 (PG)、異丙醇等。

4. 表面活性劑

表面活性劑除了加強(qiáng)抑制劑/激動(dòng)劑溶解以外，還能使其顆粒濕潤(rùn)、分散，減少抑制劑/激動(dòng)劑在體內(nèi)體外稀釋時(shí)的析出沉淀。

傳統(tǒng)的表面活性劑有：吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油 (Cremophor EL，M9294) 等；

新型的表面活性劑有：甘油酯44/14、聚乙二醇硬脂酸酯15 (Solutol HS-15)。

新型比傳統(tǒng)表面活性劑，助溶效果、生物相容性及安全性更好，所以現(xiàn)在常用Solutol HS-15替代吐溫80。

5. 脂類

脂類可以有效的幫助脂溶性強(qiáng)的化合物溶解，常用的有玉米油（Corn oil，M9109）、辛酸/癸酸甘油三酯等。

在了解過(guò)常用的抑制劑/激動(dòng)劑溶解助溶物后，接下來(lái)需要考慮的是如何選擇合適的助溶物配合輔助抑制劑/激動(dòng)劑溶解。一般我們可以從需要溶解的化合物結(jié)構(gòu)和給藥方式兩方面考慮。

1. 抑制劑/激動(dòng)劑結(jié)構(gòu)

常見的親水基團(tuán)：—OH、—CHO、—COOH、—NH2等；

常見的疏水基團(tuán)：所有的烴基 (—CnH2n+1、—CH=CH2、—C6H5等)、鹵原子 (—X)、硝基 (—NO2) 等；

常見的酸性基團(tuán)：-COOH 、–OH、–SO3H等；

常見的堿性基團(tuán)：-NR2等；

一般親水基團(tuán)多的化合物水溶性比疏水基團(tuán)多的強(qiáng)；堿性基團(tuán)多時(shí)，降低pH 可以提高溶解度，酸性反之，但注意不要使用對(duì)動(dòng)物組織有刺激性的極端pH，合適的pH值范圍為2-9。

考慮到助溶劑和表面活性劑等的毒性，首先考慮使用單一溶媒；若單一溶媒不能溶解時(shí)，再考慮配方中加入助溶劑和表面活性劑等。極性較大的助溶劑有DMSO、DMA和NMP等，極性稍小的助溶劑有乙醇、PG和PEG等。

2. 給藥方式

常見的給藥方式分為靜脈注射、灌胃、腹腔注射、皮下注射，不同的給藥方式可用劑型也有所不同：

溶液劑：一般是非揮發(fā)性抑制劑/激動(dòng)劑的澄明溶液，大多數(shù)以水為溶劑，少量用到油溶液。

乳劑：指互不相溶的兩相液體，其中一相以小液滴狀態(tài)分散于另一相液體中，形成非均勻分散的液體制劑。

混懸劑：一般指難溶性的固體抑制劑/激動(dòng)劑以微粒的狀態(tài)分散于分散介質(zhì)中形成的非均質(zhì)液體制劑，微粒的粒徑（不是直徑）一般在0.5-10μm之間。

固體制劑：固體制劑的種類繁多，主要包括片劑、顆粒劑等，約占抑制劑/激動(dòng)劑制劑中的70%。

可根據(jù)給藥方式選擇合適的劑型及相應(yīng)的助溶劑進(jìn)行配制。

溶液的配置步驟

1. 如果所用抑制劑/激動(dòng)劑的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)溶解方法有文獻(xiàn)可供參考，須提前準(zhǔn)備好文獻(xiàn)中需用到的各種助溶物，然后先稱取少量化合物參照文獻(xiàn)描述進(jìn)行溶液配制（多數(shù)情況是先將有機(jī)溶劑加入化合物，混勻后再加水相定容到目的體積），可通過(guò)震蕩、超聲、加熱等幫助溶解。如文獻(xiàn)描述的溶解方法不能很好地溶解目的抑制劑/激動(dòng)劑，需另行摸索更為適合的溶解方法。千萬(wàn)不要在未做溶解測(cè)試預(yù)實(shí)驗(yàn)前，將大規(guī)格（數(shù)百毫克甚至克級(jí)別）的抑制劑/激動(dòng)劑一次性全部加入溶液！！！

2. 如果所用抑制劑/激動(dòng)劑的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)溶解方法沒(méi)有文獻(xiàn)可供參照，則需自行摸索適合的溶解方法。如下步驟可供參考：

第一步：嘗試將抑制劑/激動(dòng)劑溶于水或一定pH的緩沖溶液，若其能在給藥體積允許的范圍內(nèi)溶解則直接用于給藥，若不溶解則進(jìn)一步嘗試。

第二步：若上述方法不溶解，嘗試將抑制劑/激動(dòng)劑溶于乙醇、DMSO等有機(jī)溶劑（必要時(shí)調(diào)節(jié)溶液pH），一般情況下，抑制劑/激動(dòng)劑可以溶于此類有機(jī)溶劑，對(duì)于在乙醇、DMSO中難以溶解的抑制劑/激動(dòng)劑，可以進(jìn)一步嘗試玉米油等極性更弱的有機(jī)溶劑。在此之后用水稀釋有機(jī)溶劑，確保制劑中DMSO的體積分?jǐn)?shù)在20%以內(nèi)，或乙醇的體積分?jǐn)?shù)在10%以內(nèi)，稀釋前可加入適量的吐溫80、Solutol等表面活性劑進(jìn)一步增加抑制劑/激動(dòng)劑在水中的溶解度。若稀釋后抑制劑/激動(dòng)劑未析出則可用于給藥，若抑制劑/激動(dòng)劑析出則進(jìn)行下一步嘗試。

第三步：若抑制劑/激動(dòng)劑析出，可以將有機(jī)溶劑用充分溶脹的CMC-Na，MC等助懸劑的水溶液稀釋，本步驟應(yīng)注意攪拌。稀釋過(guò)程中，抑制劑/激動(dòng)劑會(huì)析出，并在助懸劑的作用下分散形成混懸劑。

重要注意事項(xiàng)

1. 各助溶物的動(dòng)物耐受劑量：雖然助溶劑、表面活性劑等可以有效的提高化合物在水相中的溶解度，但是大部分助溶物都有毒副作用或者可以干擾生物系統(tǒng)，其用量應(yīng)控制在可接受的水平。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中各助溶物的使用安全范圍如下表所示：

2. 給藥體積根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)際情況進(jìn)行考慮，下表為為常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生理常數(shù)及口服給藥時(shí)對(duì)體積的要求

注：對(duì)于嚙齒類動(dòng)物。其體重可能隨飼養(yǎng)時(shí)間等因素存在較大差異，比如一般用于藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)的大鼠體重大約在200g-250g之間，但對(duì)于如肥胖癥模型大鼠，其體重可達(dá)800g以上，一概而論的給藥體積可能會(huì)造成偏差，所以給藥體積具體根據(jù)實(shí)時(shí)動(dòng)物體重來(lái)決定。

若給藥體積過(guò)大：考慮對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成損傷，也可能影響動(dòng)物對(duì)抑制劑/激動(dòng)劑的吸收過(guò)程，如小鼠灌胃體積一般是0.1-0.8mL，按上表計(jì)算單次最大不能超過(guò)0.9mL，否則會(huì)對(duì)動(dòng)物造成傷害，且數(shù)據(jù)也不準(zhǔn)確；

若給藥體積過(guò)?。?/strong>很可能造成劑量不準(zhǔn)確，影響數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性。如小鼠給藥建議用1mL/kg以上的給藥體積，因?yàn)橐恢恍∈蟠蟾?0g左右，采用1mL/kg的給藥體積，每只小鼠的給藥體積就是20μl左右，體積較小，很容易產(chǎn)生誤差，所以可以通過(guò)降低配藥濃度來(lái)提高給藥體積。

3. 結(jié)合給藥方式的溶劑是否需要等滲：若靜脈注射則需要等滲溶液，所以配藥的水相多用生理鹽水而非水；而灌胃給藥不要求等滲，用水就可以。

4. 配制抑制劑/激動(dòng)劑溶液的穩(wěn)定性：動(dòng)物給藥的溶液如果不進(jìn)行穩(wěn)定性考察，建議現(xiàn)配現(xiàn)用，以防止化合物不穩(wěn)定而降解或者溶液存放冰箱時(shí)低溫析出。有的化合物還需要注意避光、遠(yuǎn)離高溫等。

在具體實(shí)驗(yàn)研究中，我們一般是不斷去摸索。畢竟在動(dòng)物給藥實(shí)驗(yàn)中，我們不僅要考慮抑制劑/激動(dòng)劑是否溶解，還要考慮到各種添加物質(zhì)動(dòng)物體內(nèi)的耐受劑量范圍、結(jié)合給藥方式的溶劑是否需要等滲、抑制劑/激動(dòng)劑是否會(huì)在體內(nèi)析出、配制藥液的穩(wěn)定性等多方面的問(wèn)題。這些都是需要依靠不斷地摸索來(lái)獲取經(jīng)驗(yàn)的。

確實(shí)，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，動(dòng)物給藥是一個(gè)相對(duì)而言比較繁瑣的步驟。小默在這里也只能給大家一些最基礎(chǔ)的建議，至于你手中的抑制劑/激動(dòng)劑到底應(yīng)該怎樣才能更好地溶解，更好地發(fā)揮藥效，還是建議大家在查閱相關(guān)資料外，自己動(dòng)手配制少量摸索一下。

祝大家的實(shí)驗(yàn)都能順順利利，AbMole永遠(yuǎn)是真誠(chéng)陪伴在你身邊的抑制劑專家~

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