產(chǎn)品內(nèi)容：

100 μL Calcein AM, 2 mM in 無水 DMSO（200T） 

500 μL Calcein AM, 2 mM in 無水 DMSO（1000T） 

應(yīng)用范圍：活細(xì)胞熒光示蹤探針

產(chǎn)品參數(shù) 

λEx/λEm (calcein) = 494/517 nm (pH 8) 

儲存條件 

本產(chǎn)品-20℃避光保存，推薦條件下可以保存 6 個月。

產(chǎn)品介紹 

Calcein , AM 是一種對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，它可以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切 Calcein。Calcein 帶高度負(fù)電荷，可以被滯留在正常細(xì)胞的 胞質(zhì)內(nèi)，發(fā)出明亮的綠色熒光。由于其低毒性，Calcein , AM 可以用于研究細(xì)胞膜的完整性和長期細(xì)胞示蹤實驗。此外，它也可以被用于定量活細(xì)胞數(shù)。Calcein AM Cell Viability Assay 是在細(xì)胞活力檢測中，用來定量活細(xì)胞數(shù)的終點檢測法。試劑盒測定所產(chǎn)生的熒光信號與樣品中的活細(xì)胞數(shù)成正比（圖 1）。

圖 1. 用 Calcein AM Cell Viability Assay Kit 定量 HeLa 細(xì)胞 數(shù)。細(xì)胞在檢測前 24 h 接種于 96 孔板內(nèi)。

使用方法 

1. Calcein , AM 工作液的配置 

 1. 從冷凍狀態(tài)下取出 Calcein , AM 儲存液原管，靜置 30 min 使其恢復(fù)至室溫。 

 2. 在 10 mL 的 PBS 中加入10 μL 的 2 mM Calcein, AM 儲存液，渦旋混勻，配置成 2 μM 的 Calcein, AM 工作液。 

注：Calcein, AM 工作液的推薦濃度為 0.1-10 μM，最佳使用濃度由具體的細(xì)胞類型決定。2 μM 的 Calcein, AM 工作液適用于以下類型的細(xì)胞：NIH3T3, PtK2, HeLa 和 MDCK。

2. 細(xì)胞活力檢測 

 1. 按實驗要求將細(xì)胞接種于 96 孔培養(yǎng)板，推薦使用黑色板壁的培養(yǎng)板用于熒光檢測。對于貼壁細(xì)胞，需在檢測前一天鋪板，并設(shè)定空白對照孔。 

 2. 根據(jù)實驗要求對細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)處理。 

 3. 吸除每孔培養(yǎng)液。

 注：培養(yǎng)基中的血清可能含有酯酶活性，會增強(qiáng)背景熒光。因而這一步操作中，可用 PBS 清洗細(xì)胞，以降低殘留血清的影響。 

 4. 每孔加入 100 μL 的 2 μM Calcein, AM 工作液。 

 5. 37℃孵育 30 min 或者更長時間。 

 6. 用激發(fā)波長為 485 nm，發(fā)射波長為 530 nm 的熒光檢測儀測量培養(yǎng)板內(nèi)的熒光。

注意事項 

 Calcein , AM 遇到濕氣會分解，使用后請在-20℃下密閉冷凍保存，防止水分進(jìn)入。